Recombinant Escherichia coli BL21 with LngA Variants from ETEC E9034A Promotes Adherence to HT-29 Cells
Por:
Espinosa-Mazariego, Karina, Saldaña-Ahuactzi Z., Ochoa, Sara A. A., Gonzalez-Pedrajo, Bertha, Cevallos, Miguel A. A., Rodriguez-Martinez, Ricardo, Romo-Castillo, Mariana, Hernandez-Castro, Rigoberto, Cruz-Cordova, Ariadnna, Xicohtencatl-Cortes, Juan
Publicada:
1 ene 2023
Resumen:
The CS21 pilus produced by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is involved in adherence to HT-29 intestinal cells. The CS21 pilus assembles proteins encoded by 14 genes clustered into the lng operon. Aim. This study aimed to determine whether E. coli BL21 (ECBL) transformed with the lng operon lacking the lngA gene (pE9034A lngA) and complemented in trans with lngA variants of ETEC clinical strains, as well as point substitutions, exhibited modified adherence to HT-29 cells. Methods. A kanamycin cassette was used to replace the lngA gene in the lng operon of the E9034A strain, and the construct was transformed into the ECBL strain. The pJET1.2 vector carrying lngA genes with allelic variants was transformed into ECBLpE9034A lngA (ECBL lngA). The point substitutions were performed in the pJETlngAFMU073332 vector. Results. Bioinformatic alignment analysis of the LngA proteins showed hypervariable regions and clustered the clinical ETEC strains into three groups. Variations in amino acid residues affect the adherence percentages of recombinant ECBL strains with lngA variants and site-specific mutations with HT-29 cells. Conclusion. In this study, ECBL carrying the lng operon harboring lngA variants of six clinical ETEC strains, as well as point substitutions, exerted an effect on the adherence of ECBL to HT-29 cells, thereby confirming the importance of the CS21 pilus in adherence. © 2023 by the authors.
Filiaciones:
Espinosa-Mazariego, Karina:
Unidad de Enfermedades Infecciosas, Laboratorio de Investigación en Bacteriología Intestinal, Hospital Infantil de México Federico Gómez, Ciudad de México, 06720, Mexico
Saldaña-Ahuactzi Z.:
Unidad de Enfermedades Infecciosas, Laboratorio de Investigación en Bacteriología Intestinal, Hospital Infantil de México Federico Gómez, Ciudad de México, 06720, Mexico
Ochoa, Sara A. A.:
Unidad de Enfermedades Infecciosas, Laboratorio de Investigación en Bacteriología Intestinal, Hospital Infantil de México Federico Gómez, Ciudad de México, 06720, Mexico
Gonzalez-Pedrajo, Bertha:
Departamento de Genética Molecular, Instituto de Fisiología Celular, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad de México, 04510, Mexico
Cevallos, Miguel A. A.:
Centro de Ciencias Genómicas, Programa de Genómica Evolutiva, Universidad Nacional Autónoma de México, Cuernavaca, 62210, Mexico
Rodriguez-Martinez, Ricardo:
Unidad de Enfermedades Infecciosas, Laboratorio de Investigación en Bacteriología Intestinal, Hospital Infantil de México Federico Gómez, Ciudad de México, 06720, Mexico
Romo-Castillo, Mariana:
CONACYT-Laboratorio de Investigación en Bacteriología Intestinal, Hospital Infantil de México Federico Gómez, Ciudad de México, 06720, Mexico
Hernandez-Castro, Rigoberto:
Departamento de Ecología de Agentes Patógenos, Hospital General Dr. Manuel Gea González, Ciudad de México, 14080, Mexico
Cruz-Cordova, Ariadnna:
Unidad de Enfermedades Infecciosas, Laboratorio de Investigación en Bacteriología Intestinal, Hospital Infantil de México Federico Gómez, Ciudad de México, 06720, Mexico
Xicohtencatl-Cortes, Juan:
Unidad de Enfermedades Infecciosas, Laboratorio de Investigación en Bacteriología Intestinal, Hospital Infantil de México Federico Gómez, Ciudad de México, 06720, Mexico
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